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一些細胞和組織可在懸浮狀態(tài)下生長(cháng),但相當一部分哺乳動(dòng)物細胞需要表面貼壁。因此,用于提供細胞體外培養環(huán)境的培養瓶、培養板和培養皿除了具有良好的透明度和無(wú)毒、無(wú)菌外,還需經(jīng)表面改性處理使之能夠貼壁、分裂和生長(cháng)。細胞培養瓶瓶體設計合理,表面TC處理,適用于實(shí)驗室中等規模細胞和組織培養。細胞培養瓶是實(shí)驗室進(jìn)行長(cháng)時(shí)間細胞培養、大量細胞擴增和防污染的合適培養器皿。未處理表面適用于懸浮細胞培養;TC處理表面,經(jīng)過(guò)處理后聚苯乙烯表面具有較好親水性,適用于常見(jiàn)細胞系的粘附和伸展;超親水處理表面...
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凋亡(Apoptosis),或者說(shuō)程序性細胞死亡(Programmedcelldeath),是細胞內建的防御機制之一,在生物的正常發(fā)育及疾病抵御中起到重要的作用。凋亡過(guò)程與通路的異常,會(huì )導致多種疾病,包括腫瘤。目前至少有十數種檢測細胞凋亡的方法,從大框架上講,可以劃分為基于細胞形態(tài)、生物學(xué)功能和生化標記三大類(lèi)。然而,每一種方法都有其優(yōu)缺點(diǎn),且并非所有的方法對每一位實(shí)驗人員來(lái)說(shuō)都是實(shí)用的。細胞凋亡(Apoptosis)是細胞程序性死亡(Programmedcelldeath)的...
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原代培養的細胞,來(lái)源于胚胎、組織器官和外周血,通過(guò)特殊的分離方法制備,稱(chēng)為原代細胞。初步分離得到的細胞具有與體內細胞相似的生物學(xué)特性,是研究生進(jìn)行與物體相關(guān)的生命活動(dòng)的理想材料。原代細胞分離培養是從體內取出人/小鼠模型動(dòng)物特異性細胞,用胰蛋白酶和螯合劑(EDTA)處理,分散成單細胞,并在合適的培養基中培養,使得細胞能夠存活、生長(cháng)和繁殖的過(guò)程。原代培養是指細胞、組織和器官直接從體內取出后立即進(jìn)行培養。此時(shí)的細胞保持了原細胞的基本性質(zhì),如果是正常細胞,則仍保留二倍體數。但實(shí)際上,...
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成纖維細胞比心肌細胞更容易貼壁,具有分裂增殖能力。差異貼壁后,原代心肌細胞間中仍有少數成纖維細胞混雜,如果處理不當,很容易長(cháng)成優(yōu)勢細胞。溴脫氧尿苷(BrdU)可以干擾細胞有絲分裂,因此BrdU常規用于抑制成纖維細胞的生長(cháng)。但如果用胎牛血清培養細胞,由于胎牛血清含有很多促有絲分裂因子,BrdU很難抑制成纖維細胞的生長(cháng)。使用小牛血清可以克服這種現象,獲得90%以上的心肌細胞。觀(guān)察原代心肌細胞間形態(tài)時(shí),接種密度低,貼壁心肌細胞數量減少。為了防止存活的心肌細胞隨著(zhù)液體的更換而被丟棄,...
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細胞外泌體是細胞分泌的大小約為30-150nm的納米物質(zhì),是細胞外囊泡的一類(lèi),結構類(lèi)似于細胞,磷脂雙分子層表面具有多種特異性膜蛋白,內部搭載著(zhù)多種蛋白質(zhì)、RNA、DNA等重要生物信號物質(zhì),廣泛分布于血液、尿液、腦脊液、唾液、乳汁、膽汁等各種體液中。外泌體的來(lái)源細胞種類(lèi)非常豐富,幾乎在人體血液、尿液、母乳和唾液等多種體液中都能發(fā)現它的蹤跡??蓚鬟f包括DNA、RNA、miRNA、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)在內的多種生物活性物質(zhì),同時(shí)保護包裹的內含物免受核酸酶和蛋白酶,以及外界壞境變化引起的降解...
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CellCountingKit-8(簡(jiǎn)稱(chēng)CCK-8)試劑可用于簡(jiǎn)便而準確的細胞增殖和毒性分析。CCK-8&MTT方法比較方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)CCK-8法靈敏度高、不使用有機溶劑、檢測迅速、重復性好價(jià)格較MTT貴、CCK8試劑的顏色為淡紅色、與含酚紅的培養基顏色接近,容易漏加或多加MTT法價(jià)格便宜操作步驟較多,需要使用有機試劑,靈敏度不如CCK-8,多數需要配制,檢測時(shí)間長(cháng),細胞毒性較高一、原理:CCK-8是MTT的升級產(chǎn)品,其基本原理為:該試劑中含有WST-8【化學(xué)名:2-(2-甲氧...
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一、材料與儀器:大鼠、裂解緩沖液、濃蔗糖溶液、超速離心機、組織研磨器二、實(shí)驗步驟:1.配制裂解緩沖液和濃蔗糖溶液(PMSF在使用前添加),冰上放置。裂解緩沖液:①0.25mol/L蔗糖網(wǎng)織紅細胞標準緩沖液(RSB)②0.25mol/L蔗糖(超級純)③10mmol/Tris-HCl(pH7.4)④10mmol/LNaCl⑤3mmol/LMgCl2⑥1mmol/LDTT⑦0.5mmol/LPMSF(用前從溶于乙醇的100mmol/L貯存液中添加)濃蔗糖溶液:①2mol/L蔗糖RS...
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材料與儀器:細胞、TBS抽提緩沖液、離心管實(shí)驗步驟:步驟1:根據樣品類(lèi)型,從下列方法中選一個(gè)作為步驟1進(jìn)行操作。(1)細胞樣品①單層培養的細胞以用冰預冷的TBS將單層細胞洗滌2次,用刮棒把細胞刮入約0.5ml的TBS中,將細胞懸液轉移到冰浴的離心管中,用1mlTBS沖洗培養皿,并入離心管中的細胞懸液。于4℃以1500g離心10分鐘以收獲細胞。用5~10倍體積經(jīng)冰預冷的TBS重懸細胞并再度離心。用TE(pH8.0)重懸細胞,使細胞密度為5x107細胞/ml,轉移至一個(gè)三角燒瓶中...
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