產(chǎn)品展示
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介:常用的細胞培養基有很多種,例如:DMEM培養基、RPMI-1640培養基、MEM培養基、McCoy's 5A(改良)培養基、Ham's F-12營(yíng)養培養基等。
產(chǎn)品型號:
更新時(shí)間:2021-10-19
廠(chǎng)商性質(zhì):生產(chǎn)廠(chǎng)家
訪(fǎng) 問(wèn) 量 :2042
021-51216810
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1. BME培養基,基礎 Eagle 培養基(basal medium eagle)
BME培養基是一種廣泛使用的合成基礎培養基,可支持很多種類(lèi)的哺乳動(dòng)物細胞生長(cháng)。BME 最初由 Harry Eagle 針對 HeLa 細胞和小鼠成纖維細胞開(kāi)發(fā),其發(fā)現了體外細胞生長(cháng)的zui 低要求。BME 不含蛋白、脂類(lèi)或生長(cháng)因子。因此,BME 需要添加劑。
2. MEM培養基(Minimum Eagle's Medium)
MEM培養基是所有培養基中zui常用的一種,可用于多種懸浮和貼壁生長(cháng)的哺乳動(dòng)物細胞,包括 HeLa、BHK-21、293、HEP-2、HT-1080、MCF-7、成纖維細胞和原代大鼠星形膠質(zhì)細胞。
3. DMEM培養基,Dulbecco 改良 Eagle 培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium)
DMEM培養基是一種廣泛使用的基礎培養基,可用于支持很多種類(lèi)的哺乳動(dòng)物細胞生長(cháng)。已經(jīng)在 DMEM 中培養成功的細胞包括原代成纖維細胞、神經(jīng)元、膠質(zhì)細胞、HUVEC、平滑肌細胞,以及 HeLa、293、Cos-7 和 PC-12 等細胞系。
4. IMDM培養基(Iscove's Modified Dulbecco's Medium)
IMDM培養基是一種高度富集的合成培養基,非常適用于快速增殖的高密度細胞培養,包括 Jurkat、COS-7 和巨噬細胞。
5. RPMI-1640培養基(Roswell Park Memorial Institute 1640)
RPMI-1640 培養基被發(fā)現適用于多種哺乳動(dòng)物細胞,包括 HeLa 細胞、Jurkat 細胞、 MCF-7 細胞、PC12 細胞、PBMC 細胞、星形膠質(zhì)細胞和癌細胞。RPMI 1640 培養基相比其他培養基之所以具有*的效果,是因為其中含有還原劑谷胱甘肽和高濃度的維生素。RPMI 1640 培養基含有生物素、 維生素 B12 以及 PABA,這些成分是 Eagle’s MEM 和DMEM所不具備的。
6. M199培養基(Medium 199)
199 培養基最初配方用于雞胚成纖維細胞的營(yíng)養研究。199 培養基由 Earle’s 平衡鹽或 Hanks’ 平衡鹽配制而成。由 Earle’s 平衡鹽配制而成的培養基使用碳酸氫鹽/碳酸系統緩沖液,并在 CO2培養箱中保持 pH 值。 在大氣條件下使用 Earle’s 平衡鹽會(huì )導致培養基 pH 值迅速升高。由 Hanks’ 平衡鹽配制而成的 199 培養基使用專(zhuān)為大氣平衡設計的專(zhuān)用鹽溶液進(jìn)行緩沖,在CO2 培養箱中使用會(huì )令培養基 pH 值迅速下降。
7. McCoy's 5A(改良)培養基(McCoy's 5A (Modified) Medium)
McCoy's 5 A (改良)培養基是一種通用培養基,可支持多種類(lèi)型原代細胞、成熟細胞系以及活檢組織塊的增殖。這種培養基可支持源自正常骨髓、皮膚、脾臟、腎臟、肺、大鼠胚胎及其他組織的原代哺乳動(dòng)物細胞的生長(cháng)。Thomas McCoy 博士起初將 McCoy's5 A 培養基配制為基礎培養基 5 A 的改良版本。與其他培養基不同,McCoy's5 A 包含還原劑谷胱甘肽、細菌蛋白胨和高濃度葡萄糖。McCoy's 5A(改良)培養基使用碳酸氫鈉緩沖體系 (2.2 g/L),因此需要 5–10% CO2 的環(huán)境來(lái)維持生理 pH 值。
8. Ham's F-12營(yíng)養培養基
Ham's F-12 營(yíng)養混合物 (F-12) 起初設計用于中國倉鼠卵巢 (CHO) 細胞的無(wú)血清單細胞鋪板。自此之后,F-12 已用于 CHO 培養物的無(wú)血清生長(cháng)以及其他哺乳動(dòng)物細胞的添加血清生長(cháng),包括軟骨細胞和大鼠前列腺上皮細胞。與其他基礎培養基相比,F-12 含有更廣泛的成分,包括鋅、腐胺、Hypoxanthine和胸苷。CHO 細胞在 F-12 中的無(wú)血清生長(cháng)催生了各種改良配方。
9. Leibovitz L15培養基
Leibovitz L-15 培養基支持 HEP-2 猴腎臟細胞以及胚胎和成人組織的原代組織塊生長(cháng)。L-15 采用磷酸鹽和游離氨基酸而非碳酸氫鈉進(jìn)行緩沖。這種培養基適用于支持非 CO2 平衡環(huán)境中的細胞生長(cháng)。L-15 不含蛋白、脂質(zhì)或生長(cháng)因子。
10. Neurobasal培養基
Neurobasal 培養基是一種基礎培養基,設計用于純產(chǎn)前和胚胎神經(jīng)元細胞群的長(cháng)期維持和成熟,在與 Gibco B-27 補充劑配合使用時(shí)無(wú)需星形膠質(zhì)細胞滋養層。Neurobasal 培養基適用于大多數神經(jīng)元細胞應用。
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二、常用的細胞培養基配套試劑(緩沖液、平衡鹽溶液等)
1、無(wú)鈣、鎂、離子溶液(1000ml)
氯化鈉(NaCl)8g磷酸二氫鈉、(NaH2PO4H20)0.05g、Potassium chloride (KCl)0.2g、碳酸氫鈉(NaHCO3)1g、檸檬酸三鈉(Na3C6H5O7,H20)1g、葡萄糖1g、加去離子水或雙蒸水至1000mL
2、PBS(Phosphate-Buffered saline)磷酸鹽緩沖液
甲液:0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液、磷酸氫二鈉(無(wú)水)28.4g、氯化鈉8.77g加去離子水或雙蒸水至1000mL
乙液:0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液、磷酸二氫鈉(無(wú)水)2.4g、氯化鈉8.77g加去離子水或雙蒸水至1000mL
甲、乙液于4℃保存,使用時(shí)按表3-2所示比例,配制成所需pH濃度,高壓滅菌后室溫保存。
3、Hanks液(HBSSHank's Balanced salt solution)
⑴母液甲(20x)配法
①NaCl(A.R)160g、KCl(A.R)8g、MgSO4.7H2O(A.R)2g、MgCl.6H2O(A.R)2g依次溶于800mL雙蒸水中,前一物質(zhì)溶后再加后一種。
②CaCl2(A.R)2.8g溶于100mL雙蒸水中,溶時(shí)不斷攪拌(此液應單配,單溶)。
待上述兩溶液中的"溶質(zhì)"全溶后,將它們混合,再用雙蒸水補至1000mL,向其中加2mL氯仿作為防腐劑,置4℃保存。
⑵母液乙(20×)配法
①Na2HPO4.12H2O(A.R)3.04g、KH2PO4(A.R)1.20g、葡萄糖(A.R)20.0g溶于800ml雙蒸水中。
②0.4%酚紅液0.4g酚紅放在玻璃研缽后加0.01N、NaOH11.28mL,直到全部溶解,移入100mL容量瓶中,加水至100mL,過(guò)濾,pH為7.4,4℃保存。
待上述各"溶質(zhì)"*溶解后,用雙蒸水補至1000mL,其中加氯仿2mL作防腐劑,置40℃保存。
3)使用液(1×)配法
取母液甲和母液乙各一份,加雙蒸水18份,分裝后,塞好瓶塞,掛上標志。以115℃高壓滅菌25分鐘(以免葡萄糖破壞),置室溫后4℃保存,可使用幾個(gè)月。臨用前,用7.5%NaHCO3調至所需pH。
4、Eagle's液(EBSSEagle's Balanced salt solution)
是一種在二氧化碳(CO2)環(huán)境中短期維持細胞活性的平衡鹽溶液,可用于細胞解離前的清洗、細胞或組織的運輸、細胞計數時(shí)稀釋、溶液的配置等。
5、HEPES液
生物緩沖液,化學(xué)性質(zhì)穩定,在PH7.2~7.6范圍內,比NaHCO3緩沖液的緩沖能力更強。
6、NaHCO3緩沖液
常規緩沖體系的一部分,但是不穩定,易受空氣中CO2的含量而改變PH值,影響緩沖效果。
三、相關(guān)細胞培養知識
細胞培養也叫細胞克隆技術(shù),在生物學(xué)中的正規名詞為細胞培養技術(shù)。細胞培養是指從動(dòng)物活體體內取出組織,于模擬體內生理環(huán)境等特定的體內條件下,進(jìn)行孵育培養,使之生存并生長(cháng)。細胞培養現已廣泛應用于生物學(xué)、醫學(xué)、新藥研發(fā)等各個(gè)領(lǐng)域。通過(guò)細胞培養得到大量的細胞或其代謝產(chǎn)物。細胞的生長(cháng)需要營(yíng)養環(huán)境,用于維持細胞生長(cháng)的營(yíng)養基質(zhì)稱(chēng)為培養基。培養基按其物理狀態(tài)可分為液體培養基和固體培養基。
根據細胞生長(cháng)的恃點(diǎn),需要選擇不同方法進(jìn)行細胞傳代:
◆ 貼壁生長(cháng)的細胞用消化法傳代;
◆ 部分貼壁生長(cháng)(半懸浮生長(cháng))的細胞用直接吹打可傳代;
◆ 懸浮生長(cháng)的細胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代,或用自然沉降法吸除上清后,再吹打傳代。
1. 貼壁細胞的消化法傳代:
1)先吸除或倒掉瓶?jì)扰f培養液。
2)D-Hanks液洗2~3次。
3)向瓶?jì)燃尤脒m量消化液(胰蛋白酶或與EDTA混合液)輕輕搖動(dòng)培養瓶,使消化液流遍所有細胞表面。(注意:胰蛋白酶要預溫,溫度37℃左右為宜。)
4)消化最好在37℃環(huán)境下進(jìn)行,消化2~5 min 后把培養瓶放置顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察,發(fā)現胞質(zhì)回縮,細胞間隙增大后,應立即終止消化。
5)吸除或倒掉消化液,如用EDTA消化,需加Hanks液數毫升,輕輕轉動(dòng)培養瓶把殘留消化液沖掉,再添加培養液。如僅用胰蛋白酶可直接加少許含血清的培養液,終止消化。
6)用彎頭吸管,吸取瓶?jì)扰囵B液,反復吹打瓶壁細胞。從培養瓶底部一邊開(kāi)始到另一邊結束,以確保所有底部都被吹到,使細胞脫離瓶壁后形成細胞懸液。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔,不要用力過(guò)猛。
7) 細胞計數后分別接種在新的培養瓶?jì)取?/span>
8)置于37℃細胞培養箱培養。(注意:要定時(shí)觀(guān)察細胞,如發(fā)現污染,應及時(shí)處理。)
2. 懸浮細胞的傳代:懸浮細胞傳代可離心收集細胞后傳代,或直接傳代。
離心傳代法:
1) 將細胞連同培養液一并轉移到15 ml 離心管內。
2) 800~1000 rpm離心5 min。(注意:離心轉速要合適。轉速過(guò)低,不能有效分離細胞;離心速度過(guò)大,時(shí)間過(guò)長(cháng),會(huì )擠壓細胞造成損傷甚至死亡。)
3) 棄去上清,加新的培養液到離心管內,用吸管吹打形成細胞懸液。
4) 計數,分別接種在新的培養瓶?jì)取?/span>
直接傳代法:讓?xiě)腋〖毎恋碓谄康缀?,將上清液吸?/2~2/3,然后用吸管吹打形成細胞懸液后再傳代。
3. 部分貼壁細胞的傳代
1)部分貼壁不牢的細胞,如Hela細胞等,不經(jīng)消化處理直接吹打可使細胞從壁上脫落下來(lái),而進(jìn)行傳代。
2)對絕大部分貼壁生長(cháng)的細胞,因直接吹打對細胞損傷較大,細胞常有較大數量的丟失,因而需消化后,才能吹打傳代。
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