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要根據實(shí)際情況選擇適合的細胞凋亡檢測方法

更新時(shí)間:2022-12-19點(diǎn)擊次數:653
  細胞凋亡(apoptosis)是一種在多細胞生物體中發(fā)生的程序性細胞死亡形式,屬于細胞的正常生理過(guò)程,在生物體進(jìn)化、內環(huán)境的穩定以及發(fā)育過(guò)程中起著(zhù)重要作用,具有重要生物學(xué)意義及復雜的分子生物學(xué)機制。
  
  在生物學(xué)研究過(guò)程中常常需要檢測細胞凋亡情況。目前至少有十數種檢測細胞凋亡的方法,大致可分為基于細胞形態(tài)、生物學(xué)功能和生化標記三大類(lèi)。每一方法都有其優(yōu)缺點(diǎn),需要根據實(shí)際情況選擇適合的細胞凋亡檢測方法。
 
  

細胞凋亡檢測

 
 

  1、電子顯微鏡檢測方法
  
  在透射電鏡下,凋亡細胞體積變小。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosisnuclei),染色質(zhì)高度盤(pán)繞,出現許多空泡結構;Ⅱa期細胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化;凋亡晚期出現核解體,產(chǎn)生凋亡小體。
  
  2、細胞核形態(tài)染色法
  
  相比細胞凋亡的其他形態(tài)變化,利用熒光染料配合熒光顯微鏡對細胞核形態(tài)的觀(guān)察也是較為直接的指標。常用的DNA特異性染料有:Hoechst、DAPI以及碘化丙啶(PI)。Hoechst是與DNA特異結合的活性染料;DAPI為半通透性,用于常規固定細胞的染色;PI不能透過(guò)完整的細胞膜,但在凋亡中晚期的細胞和死細胞,PI能夠透過(guò)細胞膜而將細胞核染紅。因此將Annexin-V與PI匹配使用,就可以將凋亡早晚期的細胞以及死細胞區分開(kāi)來(lái)(Annexin-V/PI法)。
  
  3、線(xiàn)粒體膜電位檢測
  
  線(xiàn)粒體跨膜電位的下降也是凋亡細胞一個(gè)重要特點(diǎn),是細胞凋亡過(guò)程中初期發(fā)生的事件(早于核形態(tài)的變化和PS的外翻)。一旦線(xiàn)粒體跨膜電位崩潰,細胞就會(huì )進(jìn)入不可逆的凋亡過(guò)程。一些親脂性陽(yáng)離子熒光染料如Rhodamine123、DiOC6、JC-1、TMRM等,在線(xiàn)粒體跨膜電位存在的情況下可結合到線(xiàn)粒體基質(zhì),通過(guò)熒光顯微鏡觀(guān)察其熒光的增強或減弱可反應線(xiàn)粒體內膜電負性的增高或降低。
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